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        原代細胞培養
        新西蘭大白兔/大鼠膝關節軟骨細胞

        時間:2020-07-17 15:43:00 瀏覽:3081次


        威斯騰生物經過10多年的發展,獲得了上百種細胞株和四十余種原代細胞培養經驗,并建立了龐大的細胞庫及原代培養資料庫。細胞平臺有資深實驗員、規范的SOP操作文件,萬級凈化細胞房,這些條件為保質保量完成每個客戶的實驗提供了保障。 同時,威斯騰生物結合多年原代及傳代細胞培養經驗,結合平臺已有的技術優勢,建立了完善的體外藥篩實驗,并引進RTCA(Real-time cellular Analysis,實時無標記細胞記錄儀),在藥篩過程中,全程實時記錄細胞真實狀況,為藥篩提供最真實精準的實驗數據。

        無菌操作注意事項

        細胞培養一定要保持工作區的無菌清潔,先用紫外燈和臭氧殺菌1h,然后通風30min,操作前需要換細胞間專用拖鞋,雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒,穿上實驗服,戴上一次性口罩和帽子,操作時不能大聲說話,整個無菌操作都應該在酒精燈的周圍進行。


        新西蘭大白兔膝關節軟骨細胞原代分離培養

        操作方法

        (1)取成年新西蘭大白兔,耳緣靜脈注射空氣處死后,取下兔子的雙腿,立即用75%乙醇浸泡。

        (2)移入細胞房內,去除雙腿表面的皮毛及肌肉,剪取關節段,移至超菌工作臺內。

        (3)PBS洗滌數次,用手術刀或彎剪將關節表面的軟骨組織取下。

        (4)軟骨組織塊靜置5min,棄去上層液體及懸浮組織,將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化15-20min;

        (5) 4℃靜置5min;棄上清,PBS洗滌,去上清。加入0.2%膠原酶II,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化2H;
        (6)加入生長培養基終止消化,反復吹打后依次通過200目濾網。收集濾液,1200rpm離心8min,棄上清,用DMEM完全培養基重新懸浮細胞, 放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;

        (7)細胞傳代后放入預置有薄骨片或蓋玻片的培養板中進行培養。細胞完全展開后即可固定做原代鑒定。

        細胞形態

        膝關節軟骨原代培養過程中,約24小時即可出現貼壁生長,細胞三角或多角形,生長緩慢,培養3-5天進入快速增殖期。

        大鼠膝關節軟骨細胞的原代培養

        操作方法

        (1)取四周齡SD大鼠,頸椎脫臼法處死后立即用75%乙醇浸泡,移入超凈工作臺內,用大頭針固定大鼠四肢于工作臺面的泡沫板上。

        (2)碘酒擦拭四肢,再用酒精棉球擦拭,無菌條件下用滅菌消毒后的鑷子和剪刀分離大腿腿骨,盡可能去除筋膜、肌肉和結締組織;從關節處分離出軟骨組織,將其剪成小于1mm3的組織塊,用含雙抗的PBS溶液沖洗兩遍。

        (3)軟骨組織塊靜置5min,棄去上層液體及懸浮組織,往離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化15-20min;

        (4) 4℃靜置5min;棄上清,加入0.2%膠原酶II,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化30~60min;
        (5)加入生長培養基終止消化,反復吹打后依次通過200目濾網。收集濾液,1200rpm離心8min,棄上清,用DMEM完全培養基重新懸浮細胞, 放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;

        (7)放入預置有薄骨片或蓋玻片的培養板中進行培養。每3天更換培養液至第5天改為無血清培養液。免疫組化鑒定原代細胞。

        細胞形態

        膝關節軟骨原代培養過程中,約24小時即可出現貼壁生長,細胞三角或多角形,生長緩慢,培養3-5天進入快速增殖期。


        威斯騰實驗服務流程


        威斯騰生物服務項目

        分子生物學檢測 蛋白質與免疫學 動物實驗
        實時熒光定量PCR 單克隆抗體制備 帕金森疾病模型
        免疫共沉淀(Co-IP) 多克隆抗體制備 抑郁癥動物模型
        ELISA(酶聯免疫吸附法)技術 Western-blot 實驗服務 脊髓損傷模型
        生化指標檢測 蛋白雙向電泳實驗服務 腦外損傷模型
        雙熒光素酶報告基因檢測 原核蛋白表達純化 骨神經損傷模型
        染色質免疫共沉淀(ChIP) 真核蛋白表達純化 心肌缺血模型
        GST pull Down ITRAQ定量蛋白質組學 心力衰竭模型
        SLAC蛋白組學 肺動脈高血壓動物模型
        高血壓模型
        病毒包裝純化 實驗課題整體外包 粥樣動脈硬化模型
        過表達/干擾慢病毒包裝純化 整體課題外包 大腦中動脈阻塞模型
        過表達/干擾腺病毒包裝純化 細胞整體實驗外包 慢性支氣管炎模型
        逆轉錄病毒包裝純化 動物整體實驗外包 過敏性哮喘模型
        腺相關病毒包裝純化 肺炎大鼠模型
        肝炎-肝硬化-肝癌模型
        蛋白芯片 原代細胞培養 肝纖維化模型
        細胞因子芯片 骨髓間充質干細胞培養 膽結石模型
        生長因子芯片 脂肪干細胞培養 急性胰腺炎模型
        信號通路磷酸化水平檢測芯片 心肌成纖維細胞培養 急性腎衰竭模型
        BioPlex懸浮芯片 軟骨細胞培養 體內血栓模型
        生長因子芯片 血管內皮細胞培養 關節炎模型
        炎癥因子芯片 神經元細胞培養 I型和II型糖尿病模型
        血管生成因子芯片 內皮組細胞原代培養 裸鼠成瘤
        凋亡因子芯片 基因編輯動物
        趨化因子芯片 電生理相關服務 動物整體實驗服務
        HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 膜片鉗實驗
        細胞生物學 高通量測序 代謝組學
        細胞原代培養 mRNA測序 氣相色譜GC/MS
        MTT檢測 LncRNA測序 液相色譜LC/MS
        細胞凋亡檢測 全基因組測序 核磁共震NMR
        細胞周期檢測 RNA-Seq測序
        細胞克隆形成實驗 外顯子測序 影像學相關實驗
        Transwell細胞遷移/侵襲 16s擴增子測序 Micro-CT
        流式分選 Small RNA測序 小動物活體成像
        CCK8/XTT檢測 宏基因組測序 核磁共振
        臺盼藍檢測細胞活性 單細胞測序 PET-CT
        藥物篩選細胞學實驗 circleRNA測序
        細胞粘附性檢測 甲基化測序 基因編輯動物
        細胞劃痕實驗 條件性敲除小鼠/大鼠
        細胞生物學整體實驗 全基因敲除小鼠/大鼠
        細胞成管實驗
        病理學檢測 CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 基因芯片
        掃描電鏡 基因定點突變細胞系 LncRNA芯片
        透射電鏡 單基因敲除細胞系 miRNA芯片
        HE染色 多基因敲除細胞系 mRNA芯片
        免疫組化 目的基因敲入細胞系 甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
        Tunel(原位末端凋亡法)檢測 報告基因敲入細胞系 SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
        激光共聚焦 miRNA/LncRNA敲除細胞系
        免疫熒光
        Masson染色 CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
        原位雜交 基因敲除大鼠/小鼠
        熒光原位雜交 基因敲入大鼠/小鼠
        特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)
        行為學檢測 藥物篩選服務項目 藥效學評價
        水迷宮實驗 高通量自動藥物篩選平臺 神經系統藥物藥效學評價
        曠場實驗 細胞高內涵藥物篩選平臺 抗腫瘤藥物藥效學評價
        重復性刻板行為檢測 蛋白質組學靶標研發平臺 心血管系統藥物藥效學評價
        動物跑臺檢測 分子藥理研究平臺 泌尿系統藥物藥效學評價
        強迫游泳 生物膜片鉗藥物篩選平臺 內分泌系統藥物藥效學評價
        常規藥物體外篩選 抗炎免疫藥物藥效學評價

        【本平臺合作項目】
        分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務!
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