在線客服
        在線客服
        服務時間:8:30~17:30
        客服熱線
        400-675-6758
        客服服務熱線
        關注微信

        威斯騰公眾號

        成功案例
        基因敲除小鼠的繁育鑒定

        時間:2020-08-05 10:38:00 瀏覽:1463次



        1. Product Information

        Name

        C57BL/6-XXXtm1cyagen

        Serial Number

        KOCMP-21018-XXX

        Gene

        XXX

        NCBI ID

        18024

        Strain

        C57BL/6

        Type

        conventional knockout

        2. gRNA target sequence

        gRNA1 (matching forward strand ofgene): CAGCCCTTGGTTAGCAGCGCAGG

        gRNA2 (matching forward strand of gene): TTCTATACTAAACGTTAGCTAGG

        3. Delivery Information

         4. Genotyping Strategy

        5. PCR Screening

        Animals 2 and 6 were identified positive by PCR screening.

        Note:

        1)PCR was carried out in 25 μL volume for 35 cycles under standard conditions, with primers listed above added to each reaction.


         2) Taq DNA polymerase used was P112-01.



         3) Two controls used in PCR genotyping are:


         ? Water control: No DNA template added.


         ? Wildtype control: 400 ng of mouse genomic DNA.  



        6. Sequencing Confirmation


        Sequencing Primer for PCR product:

        Sequence primer (F1): 5’-GAAGCATTATCATTTGGTGGGAAC-3’


        Sequencing Results:


        Positive animals

        Mouse ID: 2, 6 (Deleted 4961 bp and inserted 28 bp)

        7. Breeding and Genotyping strategy

        8. 配種與繁殖匯總

        小鼠配種與繁殖情況如下圖所示。

        1+/+DNA雙鏈都含有XXX基因,即野生型小鼠;+/-為只有一條DNA鏈含有XXX基因,即雜合子小鼠;-/-DNA雙鏈都不含XXX基因,即純合子小鼠。

               (2)紅色字體標記表示純合子小鼠,藍色字體標記表示小鼠已死亡。

              PCR鑒定

             (1)5/9,2#,6#鑒定。

             根據圖一,說明:2-1、6-1用引物F1/R1進行PCR;2-2、6-2用引物F1/R2進行PCR。鑒定結果:2#,6#為雜合子。

              (2)5/19,7#~13#鑒定。

               根據圖二,說明:前面是用引物F1/R1進行PCR;后面是用引物F1/R2進行PCR。鑒定結果:7#、9#、10#為純合子;11#、12#、13#為雜合子;8#為野生小鼠。其中11#引物F1/R1條帶不明顯,后續重新取材鑒定。

        综合图区卡通动漫清纯丝袜,青青国国产视在线播放观看91,欧洲亚洲中文中韩,亚洲成女人图区,黄字幕yellow91国产,欧美 日产 国产 首页,小草在线资源视频免费观看