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        文庫構建服務
        膜體系酵母文庫構建服務

        時間:2020-07-21 15:36:00 瀏覽:1812次

        酵母雙雜交(Yeast two hybrid)技術是利用酵母遺傳學方法分析蛋白質之間的相互作用,被廣泛應用于蛋白質組學、細胞信號轉導和功能基因組學等領域,已成為分子生物學研究領域的重要實驗手段。經過不斷的完善和發展,不但可以檢測已知蛋白質之間的相互作用,更重要的在于還可發現與已知蛋白相互作用的未知蛋白。

        傳統的酵母雙雜交系統僅限于核蛋白的互作分析,不能進行膜蛋白的研究。DUALmembrane 系統(DUALmembrane system)是基于分離的泛素(split-ubiquitin)介導的膜蛋白酵母雙雜交系統,它提供了不同于常規酵母雙雜交系統的蛋白體內分析方法,使得分析膜蛋白間的互作成為現實。其主要特點是可以進行膜蛋白-膜蛋白、膜蛋白-可溶性蛋白間的互作研究。它既可以用于表達文庫的篩選,也可以應用于兩個已知蛋白(其中一個屬于膜蛋白)間互作關系的驗證。

        DUAL membrane系統

        在酵母細胞中,泛素可分為兩部分表達,即其N端部分(NubI)和C端部分(Cub),后者融合有能啟動核內報告基因表達的LexA蛋白。NubI和Cub-LexA在細胞中組成可分離的泛素蛋白([NubI:Cub]-reporter)體系。

        DUAL membrane系統技術特點

        任何一種膜蛋白都可以作為誘餌

        在細胞膜上原位檢測蛋白-蛋白間的相互作用而無需核定位信號

        使用分離的泛素結構域(NubG/Cub)使得相互作用蛋白質之間的空間位阻最小化

        蛋白間的互作信號依賴泛素特異性結合蛋白(UBPs)剪切人工轉錄因子(LexA)啟動,而不是靠轉錄,因此可以檢測蛋白自身的轉錄激活或抑制序列

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