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        模式與轉基因動物
        轉基因大(?。┦蠖ㄖ?/h6>

        時間:2020-07-17 16:51:00 瀏覽:2043次


        轉基因大(?。┦蠖ㄖ谱畛S玫囊环N方法是DNA原核顯微注射。DNA原核顯微注射是指將外源DNA通過顯微注射的方法注射到受精卵的原核內,注射DNA整合到大鼠受精卵的基因組中,并穩定遺傳給后代。 賽業所使用的PiggyBac系統DNA顯微注射,制備的轉基因鼠基因表達陽性率為常規質粒DNA顯微注射的2倍以上!


        PiggyBac系統技術原理:

        PiggyBac (PB) 系統是利用PB轉座子特有的“剪切和粘貼”機制,使DNA片段在載體和基因組之間“自由”的轉移,從而有效介導外源DNA片段對基因組的整合。轉座時,轉座酶有效的識別特異的轉座子序列(ITRs),與轉座子末端結合形成短暫的發夾結構,“剪切”后脫離,“粘貼”至基因組的TTAA位點。Cyagen實驗數據表明,PiggyBac系統基因表達陽性率為常規質粒DNA顯微注射的2倍以上!


        PiggyBac (PB)系統優勢:

        • 更高的整合效率
        • 更高的目的基因表達概率
        • 更大的目的片段的插入
        • 更“精確”拷貝數的插入
        • 可自由移除插入片段

        轉基因鼠類型

        • 過表達轉基因鼠
        • RNAi轉基因鼠
        • microRNA轉基因鼠
        • 可誘導性/組織特異性轉基因鼠
        • BAC轉基因大鼠

        建系原則與流程

        1、原核顯微注射導入的目的基因是將目的基因隨機整合到大鼠的基因組,因此首代轉基因大鼠(F0)將會有不同的整合位點。整合基因的拷貝數可能在不 同的首代轉基因大(?。┦蠖ㄖ浦幸膊煌?。因此,每只F0代鼠需要作為一個獨立的譜系研究,并且與其它F0代鼠分開進行繁殖。由于外源基因一般只整合在二倍體動物的其中 一條染色體上,屬于半合子,其后代只有一部分個體帶有整合的基因,需要進行篩選鑒定。
        2、原核顯微注射獲得PCR陽性F0代雜合子鼠。
        3、F0代鼠達到性成熟后(8周)與野生型鼠進行交配,獲得F1代鼠。
        4、對交配獲得的F1代鼠進行基因型鑒定,理論上,F1代鼠中有50%為轉基因雜合子大鼠,50%為野生型鼠。


        注意事項
        1)每只F0代鼠基因型都不一樣,不能進行F0之間的自交,只能先與野生型交配,篩選出基因型一致的F1。(假如F0代有多個位點的外源基于整合,F1還有可能有多種基因型)。

        2) 獲得F1鼠后,可以進行蛋白表達鑒定,優先篩選出表達的鼠后再進行后續的傳代和保種。


        威斯騰實驗服務流程



        威斯騰生物服務項目

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        高血壓模型
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        掃描電鏡 基因定點突變細胞系 LncRNA芯片
        透射電鏡 單基因敲除細胞系 miRNA芯片
        HE染色 多基因敲除細胞系 mRNA芯片
        免疫組化 目的基因敲入細胞系 甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
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